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《江苏农业科学》[ISSN:1002-1302/CN:32-1214/S]

卷:

第43卷

期数:

2015年05期

页码:

46-48,134

栏目:

生物技术

出版日期:

2015-05-25

文章信息/Info

Title:

Optimization of conditions for preparation of competent cell of Escherichia coli with low activity after long-term preservation

作者:

晏国洪;  姜山

贵州师范大学生命科学学院，贵州贵阳 550001

Author(s):

Yan Guohong; et al

关键词:

大肠杆菌; 感受态细胞; 转化率; 优化

Keywords:

-

分类号:

Q813.1⁺1

DOI:

-

文献标志码:

A

摘要:

研究了CaCl₂溶液处理方法、长期保存的原始菌种活化次数、离心条件对感受态细胞最终转化效率的影响，并分析其最佳转化效率参数、优化感受态制备和转化方法。结果发现：使用过滤处理的CaCl₂比灭菌处理的CaCl₂制备的感受态细胞转化效率高。在其他条件相同的情况下，长期保存的大肠杆菌菌种活化3次以上的转化率最高；制备感受态细胞第1次离心在4 ℃、4 000 g条件下离心15 min，第2次离心时在4 ℃、4 000 g条件下离心 5 min 得到的感受态细胞转化率最高。

Abstract:

-

参考文献/References:

［1］夏鹤鸣，张波，乔磊，等. 感受态细胞制备技术的研究进展［J］. 中国甜菜糖业，2013(1)：21-24.
［2］李代宗，赵晓瑜，倪志华，等. 少量制备大肠杆菌感受态细胞条件探索［J］. 生物技术，2006，16(6)：55-57.
［3］房功思.浅谈大肠杆菌感受态细胞的几种制备方法［J］. 安徽卫生职业技术学院学报，2008，7(2)：96-97.
［4］曹际斌，石育原，谷秀彬，等. 一种简易的制备感受态大肠杆菌细胞的新技术［J］. 白求恩医科大学学报，1993，19(3)：306-307.
［5］张丽霞，贾海燕. 一种简便高效大肠杆菌感受态细胞制备方法［J］. 江苏农业科学，2013，41(12)：41-42.
［6］郭姣洁，薛永常，薛张伟，等. 热激后冰浴时间与复苏时间对化学转化法转化效率的影响［J］. 农业科学与技术，2010，11(9)：198-200.
［7］令利军，朱艳，王红梅，等. 保存时间及温度对大肠杆菌感受态转化效率的影响［J］. 生物技术通讯，2004(1)：51-52.
［8］冯建成，牛成，邢旭，等. 大肠杆菌HB101感受态细胞制备条件的优化［J］. 热带生物学报，2010，1(3)：224-227.
［9］唐颜苹，王小媚，何薇，等. 大肠杆菌感受态细胞保存条件的研究［J］. 华中农业大学学报，2008，27(6)：745-748.
［10］奥斯伯，金斯顿，塞德曼，等. 精编分子生物学实验指南［M］. 马学军，跃龙，译. 4版. 北京：科学出版社，2005.
［11］杨坤，巩振辉，李大伟，等. 大肠杆菌高效感受态细胞的制备及快捷转化体系的建立［J］. 北方园艺，2010(14)：127-130.
［12］罗婵，汤刚彬，谢体三，等. 感受态细胞制备与保存方法的比较研究［J］. 生物技术，2005，15(1)：52-54.
［13］罗锋，余腾，范丽梅. 感受态细胞制备和质粒转化冰浴时间对大肠埃希菌转化效率的影响［J］. 江汉大学学报：自然科学版，2011，39(3)：82-85.
［14］梁建庆，叶志华，江秀梅，等. 转化条件对质粒DNA转化大肠杆菌的影响［J］. 微生物学杂志，2004，24(4)：15-17.
［15］刘进元. 分子生物学实验指导［M］. 北京：清华大学出版社，2002：22-29.
［16］王友如. CaCl₂浓度对感受态细胞转化效率的影响［J］. 湖北师范学院学报：自然科学版，2006，26(3)：30-32.
［17］梅运军，陈向东，谢志雄，等. Ca²⁺对诱导大肠杆菌摄取外源DNA的影响［J］. 武汉大学学报：理学版，2012(4)：354-358.
［18］桓明辉，关艳丽，陈飞. 大肠埃希菌DH5α感受态细胞转化率变化的研究［J］. 微生物学杂志，2013，33(1)：63-65.
［19］张岚岚，徐春燕，徐昌杰.大肠杆菌感受态细胞转化功能的影响因素［J］. 细胞生物学杂志，2004，26(4)：429-432.
［20］陈飞，吴红艳，桓明辉，等. Tetramycin抗性基因克隆及生物活性的测定［J］. 微生物学杂志，2012，32(1)：17-22.
［21］Mandel M，Higa A. Calcium-dependent bacteriophage dna infection［J］. Journal of Molecular Biology，1970，53(1)：159-162.

相似文献/References:

[1]张新爱,郑光荣,申建忠,等.纳米复合材料标记物放大电化学免疫分析乳制品中的大肠杆菌[J].江苏农业科学,2014,42(12):342.
　Zhang Xinai,et al.Analysis of amplified electrochemical immunoassay of Escherichia coli in dairy products by nanocomposite-based labels[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2014,42(05):342.
[2]方光远,胡志华,蒋加进,等.南京地区动物源大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶基因检测[J].江苏农业科学,2014,42(12):255.
　Fang Guangyuan,et al.Detection of extended-spectrum β-lactamase gene in animal Escherichia coli in Nanjing area[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2014,42(05):255.
[3]刘玉华,陈光明,方向红,等.泰州地区鸭源大肠杆菌的分离鉴定与耐药性试验[J].江苏农业科学,2014,42(12):260.
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[4]万洪善,袁芹.改性碳纳米管吸附水中肠道菌群的研究[J].江苏农业科学,2014,42(11):395.
　Wan Hongshan,et al(9).Study on absorption of intestinal microflora in water with modified carbon nanotubes[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2014,42(05):395.
[5]孙钰航,刘艳杰,李海涛,等.辽宁千山地区含cry8类基因的苏云金芽孢杆菌的分离、克隆与表达[J].江苏农业科学,2014,42(10):28.
　Sun Yuhang,et al.Isolation， cloning and expression of cry8-like gene from Bacillus thuringiensis in Qianshan area of Liaoning Province[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2014,42(05):28.
[6]胡辉,黄光中,尧国民,等.兔感染球虫病继发大肠杆菌病的诊断及病因分析[J].江苏农业科学,2013,41(07):201.
　Hu Hui,et al.Diagnosis and etiology analysis of rabbit coccidiosis infection secondary to E. coli disease[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2013,41(05):201.
[7]丁月云,余大华,孟云,等.中草药复方对猪常见致病菌的体外抑菌试验[J].江苏农业科学,2013,41(11):236.
　Ding Yueyun,et al.Bacteriostatic tests in vitro of Chinese herbal compounds against common porcine pathogens[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2013,41(05):236.
[8]杨庆稳.表达EGF乳酸菌对断奶仔猪回肠中大肠杆菌的影响[J].江苏农业科学,2014,42(01):158.
　Yang Qingwen,et al.Effect of lactobacillus expressing EGF on Escherichia coli in ileum of weaned pigs[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2014,42(05):158.
[9]王东升,张世栋,李宏胜,等.大肠杆菌感染对猪血液生化指标的影响[J].江苏农业科学,2014,42(04):172.
　Wang Dongsheng,et al.Effect of Escherichia coli infection on blood biochemical indices of pigs[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2014,42(05):172.
[10]李贵萧,朱宗涛,康燕青,等.鸡大肠杆菌的血清抗性与致病性检验[J].江苏农业科学,2015,43(11):301.
　Li Guixiao,et al.Serum resistance and pathogenicity of avian Escherichia coli[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2015,43(05):301.
[11]张丽霞,贾海燕.一种简便高效大肠杆菌感受态细胞制备方法[J].江苏农业科学,2013,41(12):41.
　Zhang Lixia,et al.A simple and efficient preparation method of Escherichia coli competent cells[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2013,41(05):41.
[12]代军.大肠杆菌感受态细胞制备及转化条件优化[J].江苏农业科学,2015,43(04):53.
　Dai Jun.On improving and optimizing the conditions for preparation and transformation of Escherichia coli competent cells[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2015,43(05):53.

备注/Memo

备注/Memo:

收稿日期：2014-10-22
基金项目：国家自然科学基金(编号：30860158、31260426)。
作者简介：晏国洪(1989—)，女，贵州遵义人，硕士研究生，研究方向为植物生理生态学。E-mail：18798093169@ 163.com。
通信作者：姜山，教授，博士，研究方向为植物病理学。E-mail：kyosan200312@hotmail.com。

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更新日期/Last Update: 2015-05-25