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《江苏农业科学》[ISSN:1002-1302/CN:32-1214/S]

卷:

第44卷

期数:

2016年05期

页码:

72-75

栏目:

生物技术

出版日期:

2016-05-25

文章信息/Info

Title:

Optimization of FPNI-PCR reaction system for Viola×wittrockiana Gams.

作者:

李婧;  曾媛;  龚胜;  李霆格;  杨文汉;  王健

热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点实验室/海南大学园艺园林学院，海南海口 570228

Author(s):

Li Jing; et al

关键词:

大花三色堇; FPNI-PCR; 体系优化

Keywords:

-

分类号:

Q785

DOI:

-

文献标志码:

A

摘要:

融合引物与巢式聚合酶链式反应(fusion primer and nested integrated PCR，FPNI-PCR)是一种分离并扩增已知序列旁未知序列的有效方法。以大花三色堇(Viola×wittrockiana Gams.)为材料，为提高FPNI-PCR产物特异性，增加条带清晰度，降低非特异性条带的干扰，对FPNI-PCR反应体系中第1轮的模板DNA浓度进行对比，优化了第3轮反应中引物浓度、Taq DNA 聚合酶浓度、缓冲液用量，筛选了第3轮特异性引物的退火温度，进一步完善了FPNI-PCR反应体系。各因素优化比对试验表明：FPNI-PCR第1轮反应体系应以稀释后的DNA为模板，20 μL体系中，用量在4.5～10 ng。第3轮最优反应体系为：20 μL反应体系中，特异性引物浓度0.2 μmol/L，引物SP2浓度 0.75 μmol/L，Taq DNA酶用量1.0 U，dNTP用量2 μL，10×buffer(20 mmol/L，Mg²⁺ plus)用量2 μL，模板1 μL(第2轮反应稀释100倍后取1 μL为模板)，ddH₂O补足。第3轮反应中，退火温度为64 ℃或66 ℃时条带最为清晰。

Abstract:

-

参考文献/References:

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相似文献/References:

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　Chen Hongzhi,et al.Physiological response of Viola tricolor and Viola cornuta under heat stress[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2017,45(05):124.

备注/Memo

备注/Memo:

收稿日期：2015-09-04
基金项目：国家自然科学基金(编号：31060265、31260488)；海南大学中西部计划学科建设项目(编号：ZXBJH-XK008)。
作者简介：李婧(1990—)，女，山东青岛人，硕士研究生，研究方向为园林植物分子育种。E-mail：1434835679@qq.com。
通信作者：王健，教授，主要从事植物遗传与种质资源研究工作。Tel：(0898)66276096；E-mail：wjhnau@163.com。

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更新日期/Last Update: 2016-05-25