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《江苏农业科学》[ISSN:1002-1302/CN:32-1214/S]

卷:

第45卷

期数:

2017年04期

页码:

18-22

栏目:

生物技术

出版日期:

2017-02-20

文章信息/Info

Title:

Geographical distribution of Bacillus thuringiensiss and vip3 genes in different natural environment

作者:

李帅; 刘荣梅; 李海涛; 高继国

东北农业大学，黑龙江哈尔滨 150030

Author(s):

Li Shuai; et al

关键词:

苏云金芽孢杆菌; vip基因; 鉴定; 气候类型; 生物活性测定

Keywords:

-

分类号:

Q938.1⁺1

DOI:

-

文献标志码:

A

摘要:

营养期杀虫蛋白(vegetative insecticidal protein，简称VIP)是苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis，Bt)在营养期表达的一类新型杀虫毒蛋白，该蛋白的发现使得Bt杀虫剂在杀虫活性、杀虫范围方面得到很大突破。首次比较我国不同气候类型(热带：海南省，亚热带：广西壮族自治区，温带：黑龙江省)的Bt菌株和vip基因的分布情况。结果表明，从海南省841份土样中分离出156株Bt菌(18.55%)，从广西地区1 420份土样中分离出356株Bt菌(25.07%)，从黑龙江省1 010份土样中分离出167株Bt菌(16.53%)；从海南省的156株Bt菌中鉴定出22个vip基因(占14.1%)，从广西地区的356株Bt菌中鉴定出2个vip基因(占5.62%)，然而，从黑龙江省的156株Bt菌中没有鉴定出vip基因(0%)。利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，简称PCR)方法成功克隆出1个vip3Aa的全长基因并获得登录号KT792883，将该基因插入到表达载体pET-21b中，转化菌株Rosetta(DE3)，在低温条件下表达88 ku的蛋白，将该蛋白进行生物活性测定，结果显示，该蛋白对甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)具有较好的杀虫活性，LC₅₀为5.124 ng/mg，对棉铃虫(Heliothis armigera)活性较低，LC₅₀为870.1 ng/mg。研究结果显示，Bt菌株和vip基因的分布有地域性差异，在温度较高的热带、亚热带地区有比较丰富的Bt菌株和vip基因资源。研究将有利于充分利用土壤中的Bt菌株，分离具有自主知识产权和重要应用价值的新型vip抗虫基因，这将会为研究新型杀虫蛋白、延缓害虫抗性问题提供有益帮助。

Abstract:

-

参考文献/References:

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doi：10.15889/j.issn.1002-1302.2017.04.006[HT9.]
〖HT〗〖FK(W7*2。54〗[SQ1]〖HT2SS〗[CX2]芒果ANR基因的克隆及其表达分析 [CX]〖KH*2D〗[HT5K]李先良¹， 赵志常^2，3， 高爱平^2，3， 陈业渊^2，3， 黄建峰^2，3， 党志国^2，3， 罗睿雄^2，3
〖HT6SS〗1.荆楚理工学院生物工程学院，湖北荆门 448000； 2.中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所/
农业部华南作物基因资源与种质创制重点开发实验室； 3.国家热带果树品种改良中心，海南儋州 571737 〖FK)〗〖HT5”H〗〖HK50〗摘要：〖HTSS〗花青素还原酶(anthocyanidin reductase，简称ANR)基因是植物产生原花青素的关键基因，对于研究原花青素的代谢有重要的作用。根据已经报道的ANR基因的序列设计兼并引物，采用3′cDNA末端快速扩增(3′RACE)、5′cDNA末端快速扩增(5′RACE)方法，从芒果果实内克隆到1个ANR基因，其全长cDNA序列为1 201 bp。该基因开放阅读框为1 008 bp，编码335个氨基酸，等电点为5.41，分子量为36.33 ku。对基因组扩增得到了1 810 bp长度的片段，分析发现，该基因含有5个内含子，内含子位置分别为130～646 bp、733～814 bp、1 017～1 080 bp、1 259～1 349 bp、1 563～1 651 bp。通过系统发育树分析发现，该基因编码的蛋白与可可、葡萄等果树具有较近的亲缘关系。对不同芒果品种中ANR基因的表达进行分析发现，该基因在绿色的桂七品种中表达量较高，而在红色的贵妃品种中表达量较低。
〖HT5”H〗关键词：〖HT5”SS〗芒果；原花青素；花青素还原酶(ANR)；基因克隆；表达分析
〖HT5”H〗中图分类号：S667.701；Q785 〖HT5”H〗文章编号：1002-1302(2017)04-0022-04[HS)][HT9.SS] 〖FQ(22。26，ZX，DY-W〗〖CDF13〗〖HT6SS〗
收稿日期：2016-01-07
基金项目：国家自然科学基金(编号：31471850)；农业部热带作物种质资源保护(编号：15RZZY-07)；农业部“948”计划(编号：2011-G13)；湖北省荆门市科技局项目(编号：110588)。
作者简介：李先良(1976—)，男，湖北武汉人，博士，副教授，研究方向为园艺植物遗传改良和分子生物学。E-mail：libusher@sina.com。
通信作者：赵志常，博士，副研究员，研究方向为热带果树遗传育种与分子生物学。E-mail：zhaozhichang2001@163.com。 [HS2][HT8.5H]参考文献：[HT8.SS]
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备注/Memo

备注/Memo:

收稿日期：2016-01-12
基金项目：国家自然科学基金(编号：31401812)；东北农业大学科学研究基金(编号：2010RCB54)
作者简介：李帅(1990—)，女，黑龙江依安人，硕士研究生，主要研究方向为苏云金芽孢杆菌vip基因的挖掘及作用机制。E-mail：ls90729@163.com。
通信作者：高继国，硕士，教授，主要研究方向为苏云金芽孢杆菌新型基因的发掘及作用机制。E-mail：gaojiguo1961@hotmail.com。

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更新日期/Last Update: 2017-02-20