|本期目录/Table of Contents|

[1]刘笑尘,高爽,许伟,等.产反式-4-羟脯氨酸重组大肠杆菌的构建及优化[J].江苏农业科学,2017,45(13):19-23.
　Liu Xiaochen,et al.Construction and optimization of trans-4-hydroxyproline-producing recombinant Escherichia coli[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2017,45(13):19-23.
点击复制

产反式-4-羟脯氨酸重组大肠杆菌的构建及优化(PDF)
分享到：

《江苏农业科学》[ISSN:1002-1302/CN:32-1214/S]

卷:
第45卷
期数:
2017年13期
页码:
19-23
栏目:
生物技术
出版日期:
2017-07-05

文章信息/Info

Title:
Construction and optimization of trans-4-hydroxyproline-producing recombinant Escherichia coli
作者:
刘笑尘1;  高爽1;  许伟2;  戴良英1
1.湖南农业大学植物保护学院，湖南长沙 410128； 2.布莱尼斯生物科技有限公司，江苏无锡 214100
Author(s):
Liu Xiaochen; et al
关键词:
反式-4-羟脯氨酸; 重组大肠杆菌; 起始效率; 延伸效率; 优化
Keywords:
-
分类号:
S182
DOI:
-
文献标志码:
A
摘要:
反式-4-羟脯氨酸为手性亚氨基酸，是一种被广泛应用于医疗、美容、化工、畜牧领域的生产原料。通过以下工作构建了1株能够高效表达反式-4-脯氨酸羟化酶基因的重组大肠杆菌：(1)使用JCAT软件优化反式-4-脯氨酸羟化酶的编码区基因序列，改变141个碱基(替换了138个同义密码子)，使其CAI指数由0.396 5优化至 0.927 7，C/G由73.626 3%优化至59.706 9%，优化mRNA延伸效率；(2)优化非编码区序列，选择色氨酸启动子并进行简化，使RBS区包含SD序列，在RBS区前添加g10-L翻译增强子，使用RNAstructure软件优化起始区序列的二级结构，增强mRNA的起始效率；(3)构建重组大肠杆菌DH5α/pUC-19-pH，优化宿主及质粒载体，最终得到的重组菌DH5α/pUC-19-pH比酶活达到0.010 8 U/mg。
Abstract:
-

参考文献/References:

［1］范镇基. 非蛋白氨基酸的功能与应用［J］. 氨基酸杂志，1990(1)：25-34.
［2］张慧君，罗仓学，张新申，等. 胶原蛋白的应用［J］. 皮革科学与工程，2003，13(6)：37-41.
［3］陈申如，蔡扬鹏，周琼，等. 鲨鱼鱼皮、鱼骨胶原蛋白的纯化及其特性的初步研究［J］. 中国食品学报，2006，6(1)：173-178.
［4］Shibasaki T，Mori H，Chiba S，et al. Microbial proline 4-hydroxylase screening and gene cloning［J］. Applied and Environmental Microbiology，1999，65(9)：4028-4031.
［5］Shibasaki T，Mori H，Ozaki A. Enzymatic production of trans-4-hydroxy-L-proline by regio- and stereospecific hydroxylation of L-proline［J］. Bioscience，Biotechnology，and Biochemistry，2000，64(4)：746-750.
［6］Shibasaki T，Hashimoto S，Mori H，et al. Construction of a novel hydroxyproline-producing recombinant Escherichia coli by introducing a proline 4-hydroxylase gene［J］. Journal of Bioscience and Bioengineering，2000，90(5)：522-525.
［7］河田孝雄. 协和发酵生物技术公司建立了顺式-4-羟基-L-脯氨酸商业生产体系［J］. 生物产业技术，2012(3)：62.
［8］Varshavsky A. The N-end rule：functions，mysteries，uses［J］. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，1996，93(22)：12142-12149.
［9］李一帆. g10-L翻译增强序列提高外源蛋白表达的初步研究［D］. 郑州：郑州大学，2013.
［10］Kozak M. Initiation of translation in prokaryotes and eukaryotes［J］. Gene，1999，234(2)：187-208.
［11］Kozak M. Regulation of translation via mRNA structure in prokaryotes and eukaryotes［J］. Gene，2005，361：13-37.
［12］王晓花，李宏. 自洽聚类法识别大肠杆菌SD序列［J］. 内蒙古大学学报(自然科学版)，2008，39(3)：314-320.
［13］陈苏民. 原核翻译增强子［J］. 生命的化学，1993，13(5)：6-7.
［14］Tessier L H，Somdermeyer P，Faure T，et al. The influence of mRNA primary and secondary structure on human IFN-γ gene expression in E.coli［J］. Nucleic Acids Research，1984，12(20)：7663-7675.
［15］de Smit M H，van Duin J. Control of translation by mRNA secondary structure in Escherichia coli：a quantitative analysis of literature data［J］. Journal of Molecular Biology，1994，244(2)：144-150.
［16］Schulz V P，Reznikoff W S. In vitro secondary structure analysis of mRNA from lacZ translation initiation mutants［J］. Journal of Molecular Biology，1990，211(2)：427-445.
［17］张平武，王易伦，戴建新，等. mRNA翻译起始区的结构改变对几个外源基因翻译的影响［J］. 生物化学与生物物理学报，1997，29(5)：455-462.
［18］Nishi T，Itoh S. Enhancement of transcriptional activity of the Escherichia coli trp promoter by upstream A+T-rich regions［J］. Gene，1986，44(1)：29-36.
［19］刘合栋，袁春伟，张震宇. 脯氨酸-4-羟化酶在大肠杆菌中的密码子优化表达及对反式-4-羟脯氨酸生物合成的作用［J］. 生物加工过程，2014，12(6)：44-51.

相似文献/References:

备注/Memo

备注/Memo:
收稿日期：2016-03-19
基金项目：湖南省现代柑橘产业技术体系专项(编号：2015137)。
作者简介：刘笑尘(1990—)，男，湖南武冈人，硕士研究生，主要从事微生物发酵和植物与微生物分子互作研究。E-mail：373709368@qq.com。
通信作者：许伟，博士，主要从事微生物发酵研究，E-mail：49385395@qq.com；戴良英，博士，教授，主要从事植物与微生物分子互作研究，E-mail：daily@hunau.net。
更新日期/Last Update: 2017-07-05