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《江苏农业科学》[ISSN:1002-1302/CN:32-1214/S]

卷:

第45卷

期数:

2017年15期

页码:

34-38

栏目:

生物技术

出版日期:

2017-08-05

文章信息/Info

Title:

Establishment and optimization of ISSR-PCR reaction system of Dendrocalamopsis oldhami(Munro) Keng f.

作者:

徐雯¹;  瞿印权¹;  陈剑成¹;  何天友²;  荣俊冬¹;  陈礼光¹;  郑郁善¹

1.福建农林大学林学院，福建福州 350002； 2.福建农林大学艺术学院园林学院，福建福州 350002

Author(s):

Xu Wen; et al

关键词:

绿竹; ISSR; 反应体系; 扩增程序; 引物筛选

Keywords:

-

分类号:

S795.501

DOI:

-

文献标志码:

A

摘要:

以绿竹基因组DNA为ISSR-PCR扩增模板，采用单因素试验方法，对dNTPs、Mg²⁺、Taq DNA聚合酶、引物、模板DNA设置7个不同浓度梯度进行研究，并对退火温度和循环次数进行筛选，建立绿竹ISSR-PCR最佳反应体系和扩增程序，并利用优化后的体系对100条ISSR引物进行筛选。最终确定的最佳反应体系为：20 μL的扩增体系中，dNTPs浓度为0.2 mol/L，Mg²⁺浓度为2.0 mmol/L，Taq DNA聚合酶用量为1.0 U，引物浓度为0.4 μmol/L，DNA用量为50 ng，10×PCR buffer体积为2 μL、剩余体积用灭菌ddH₂O补全。扩增程序为：94 ℃预变性5 min；94 ℃变性45 s，(根据引物的退火温度)复性30 s，72 ℃延伸90 s，循环38次；72 ℃延伸10 min，4 ℃保存。以此体系为基础进行引物筛选，在100条ISSR引物中筛选出14条扩增条带清晰、多态性较高、重复性好的引物。本研究建立了绿竹ISSR-PCR最佳反应体系并筛选出高多态性引物，为绿竹的指纹图谱、遗传多样性分析、分子育种和品种鉴定等研究提供了基础。

Abstract:

-

参考文献/References:

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备注/Memo

备注/Memo:

收稿日期：2017-01-10
基金项目：福建省科技重大专项(编号：2013NZ0001)；福建省科技重大项目(编号：2010N5002)。
作者简介：徐雯(1993—)，女，江苏扬州人，硕士研究生，研究方向为森林培育理论与技术研究。E-mail：1243051350@qq.com。
通信作者：郑郁善，教授，博士生导师，主要从事森林培育与园林植物栽培研究。E-mail：zys1960@163.com。

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更新日期/Last Update: 2017-08-05