«上一篇/Previous Article|本期目录/Table of Contents|下一篇/Next Article»

《江苏农业科学》[ISSN:1002-1302/CN:32-1214/S]

卷:

第47卷

期数:

2019年第18期

页码:

199-203

栏目:

畜牧兽医与水产蚕桑

出版日期:

2019-10-15

文章信息/Info

Title:

Molecular characterization and expression of a novel internalin lmo0549 of Listeria monocytogenes

作者:

王立霞¹;  孟庆玲¹;  乔军¹;  郭晶¹;  伍晔晖¹;  才学鹏²;  蔡扩军³;  王登峰⁴

1.石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832003； 2.中国农业科学院兰州兽医研究所，甘肃兰州 730046；
3.乌鲁木齐市动物疾病控制与诊断中心，新疆乌鲁木齐 830063； 4.新疆畜牧科学院兽医研究所，新疆乌鲁木齐 830000

Author(s):

Wang Lixia; et al

关键词:

单核细胞增生李斯特菌; 内化素Lmo0549; 克隆; 分子特征; 原核表达

Keywords:

-

分类号:

S852.61

DOI:

-

文献标志码:

A

摘要:

应用PCR技术对单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)新型内化素lmo0549基因进行克隆和测序，并对其进行生物信息学分析；通过扩增获得Lmo0549蛋白氨基端抗原集中区序列，并将其亚克隆至pET-32a(+)表达载体，转入大肠杆菌中用异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-thiogalactoside，简称IPTG)诱导表达，应用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，简称SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(western blot)鉴定重组蛋白的表达形式及其抗原特异性。序列分析结果表明，扩增得到的lmo0549基因全长为 2 034 bp，编码677个氨基酸，其信号肽序列是前23个氨基酸，在Lmo0549蛋白氨基酸序列中，从N端到C端分别包括5个富含亮氨酸的重复基序(LRR)、1段PKD重复序列和1个WxL结构域；同时还存在N-联糖基化位点10个、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点14个、蛋白激酶C磷酸化位点15个。同源性分析显示，LM-SB5 lmo0549基因编码的蛋白氨基酸序列与标准株李斯特菌EGD-e，(NC_003210.1)蛋白氨基酸序列的同源性为88.04%，且在单核细胞增生李斯特菌中具有较高的保守性。SDS-PAGE分析显示，表达的Lmo0549蛋白氨基端抗原集中区具有与理论值33.8 ku相符的分子质量；蛋白质印迹法分析表明，重组蛋白 Lmo0549 与LM阳性血清可发生特异性免疫反应，为进一步探讨Lmo0549在LM侵入宿主细胞的分子作用机制奠定了前期基础。

Abstract:

-

参考文献/References:

［1］Farber J M，Peterkin P I. Listeria monocytogenes，a food-borne pathogen［J］. Microbiological Reviews，1991，55(3)：476-511.
［2］彭叶龙. 单核细胞增生李斯特菌ncRNA rli60基因缺失株的构建及部分生物学特性研究［D］. 石河子：石河子大学，2015.
［3］王旭，孙晓红，潘迎捷，等. 单增李斯特菌WaX12及其sigB缺失突变株在不同pH下生长动力学的比较［J］. 食品与生物技术学报，2016，35(5)：477-484.
［4］王少辉，刘萍萍，魏建超，等. 单增李斯特菌inlK基因缺失株的构建及其生物学特性分析［J］. 中国动物传染病学报，2017，25(4)：19-23.
［5］刘武康，陈国薇，吴嫚，等. inlA和inlB基因缺失对单核细胞增生性李斯特菌侵袭HT29结肠癌细胞的影响［J］. 食品科学，2016，37(23)：166-172.
［6］丁剑. 基于srtA的Lm细胞壁差异蛋白的筛选及lmo2714基因缺失株的构建［D］. 石河子：石河子大学，2017.
［7］Good J A，Andersson C，Hansen S，et al. Attenuating listeria monocytogenes virulence by targeting the regulatory protein PrfA［J］. Cell chemical biology，2016，23(3)：404-414.
［8］杨丽红. SigmaB基因缺失对单核细胞增生李斯特菌致病性和环境应激能力的影响［D］. 石河子：石河子大学，2013.
［9］谢堃. Rli87基因缺失对LM环境应激及致病力的影响［D］. 石河子：石河子大学，2015.
［10］谢小冬. 单核细胞增生李斯特氏菌内化素A分段表达及主要功能区的确定［D］. 哈尔滨：东北农业大学，2014.
［11］Bierne H，Sabet C，Personnic N，et al. Internalins：a complex family of leucine-rich repeat-containing proteins in Listeria monocytogenes［J］. Microbes and Infection，2007，9(10)：1156-1166.
［12］Braun L，Dramsi S，Dehoux P，et al. InIB：an invasion protein of Listeria monocytogenes with a novel type of surface association［J］. Molecular Microbiology，1997，25(2)：285-294.
［13］Cabanes D，Dehoux P，Dussurget O，et al. Surface proteins and the pathogenic potential of Listeria monocytogenes［J］.Trends in Microbiology，2002，10(5)：238-245.
［14］Cossart P，Toledo-Arana A. Listeria monocytogenes，a unique model in infection biology：an overview［J］. Microbes and Infection，2008，10(9)：1041-1050.
［15］Faralla C，Rizzuto G A，Lowe D E，et al. InlP，a new virulence factor with strong placental tropism［J］. Infection and Immunity，2016，84(12)：3584-3596.
［16］Popowska M，Krawczyk-Balska A，Ostrowski R A. InlL from Listeria monocytogenes is involved in biofilm formation and adhesion to mucin［J］. Frontiers in Microbiology，2017，8(1)：660.
［17］卢海亭，孟庆玲，乔军，等. 绵羊肺炎支原体膜蛋白p74基因的克隆、分子特征及反应原性研究［J］. 西南农业学报，2017，30(5)：1222-1228.
［18］张武宏，孙晓林，薛慧文，等. 内化素在产单核细胞李氏杆菌入侵宿主细胞过程中的作用［J］. 畜牧与兽医，2015，47(7)：137-140.
［19］孟庆玲，乔军，才学鹏，等. 单核细胞增多性李氏杆菌野毒株InlB的分子特征及其表达和纯化研究［J］. 微生物学报，2007，47(6)：1098-1101.
［20］赵丹. 4b型单核细胞增生李斯特菌InlF蛋白的致病机制研究［D］. 扬州：扬州大学，2015.
［21］吴学林. 单核细胞增生性李斯特菌srtA基因缺失株的构建及其部分生物学特性研究［D］. 石河子：石河子大学，2015.
［22］Stachowiak R，Jagielski T，Roeske K A，et al. Lmo0171，a novel internalin-like protein，determines cell morphology of Listeria monocytogenes and its ability to invade human cell lines［J］. Current Microbiology，2015，70(2)：267-274.
［23］姚浩，叶舒扬，王玉婷，等. 单核细胞增生李斯特菌NTSNΔ0287缺失株的构建及其生物学特性［J］. 中国家禽，2016，38(21)：22-28.
［24］Siezen R，Boekhorst J，Muscariello L，et al. Lactobacillus plantarum gene clusters encoding putative cell-surface protein complexes for carbohydrate utilization are conserved in specific gram-positive bacteria［J］. BMC Genomics，2006，24(7)：126.
［25］Brinster S， Furlan S，Serror P.C-terminal WxL domain mediates cell wall binding in Enterococcus faecalis and other gram-positive bacteria［J］. Journal of Bacteriology，2007，189(4)：1244-1253.

相似文献/References:

[1]印双红,张俊波.mTOR抑制剂对胞内李斯特菌繁殖的影响[J].江苏农业科学,2018,46(11):125.
　Yin Shuanghong,et al.Effect of mTOR inhibitor on intracellular survival of Listeria monocytogenes[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2018,46(18):125.

备注/Memo

备注/Memo:

收稿日期：2018-05-21
基金项目：国家自然科学基金(编号：31360596、30960274)；国家重点研发计划(编号：2016YFD0500900)；乌鲁木齐市科技局渝乌科技合作项目(编号：Y161220001)；新疆生产建设兵团中青年科技创新领军人才计划(编号：2016BC001)。
作者简介：王立霞(1992—)，女，甘肃陇西人，硕士，研究方向为病原分子生物学。E-mail：645432907@qq.com。
通信作者：乔军，博士，教授，研究方向为畜禽病原分子生物学。E-mail：qj710625@163.com。

常用功能

更新日期/Last Update: 2019-09-20