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[1]邓赣奇,陈柏东,黄增颖,等.重组菌丝霉素在毕赤酵母中的分泌表达及活性研究[J].江苏农业科学,2020,48(18):86-91.
　Deng Ganqi,et al.Study on secretory expression and activity of recombinant bacterin in Pichia pastoris[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2020,48(18):86-91.
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重组菌丝霉素在毕赤酵母中的分泌表达及活性研究(PDF)
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《江苏农业科学》[ISSN:1002-1302/CN:32-1214/S]

卷:
第48卷
期数:
2020年第18期
页码:
86-91
栏目:
生物技术
出版日期:
2020-09-20

文章信息/Info

Title:
Study on secretory expression and activity of recombinant bacterin in Pichia pastoris
作者:
邓赣奇;  陈柏东;  黄增颖;  宫莉;  张辉华;  刘燊
佛山科学技术学院生命科学与工程学院，广东佛山 528000
Author(s):
Deng Ganqi; et al
关键词:
菌丝霉素; 毕赤酵母; 重组蛋白; 饲料添加剂
Keywords:
-
分类号:
S182；S816.7
DOI:
-
文献标志码:
A
摘要:
为获得一种能分泌菌丝霉素的毕赤酵母菌并探讨菌丝霉素的活性，将优化的目的蛋白碱基序列与标签MBP基因序列融合，通过双酶切将重组基因序列插入到毕赤酵母pGAPZaA表达载体上并进行连接反应。取10 μL连接产物转化至感受态细胞，挑取含Zeocin(25 mg/L)平板筛选出的单菌落进行PCR鉴定，将阳性克隆送往测序公司测序。对鉴定正确的含有重组质粒的大肠杆菌DH5α进行活化培养并提取其质粒，得到的重组质粒进一步线性化和纯化，并电转入GS115感受态细胞中筛选出阳性克隆，诱导分泌蛋白，对其进行Western blot检测、纯化、活性分析和质谱鉴定，得到的重组蛋白为55 Ku左右，浓度为700 mg/L，纯度达到80%以上。质谱鉴定结果表明，蛋白序列的覆盖率达到98%，纯化后的蛋白也对金黄色葡萄球菌具有抑制作用，成功构建出一株能够分泌菌丝霉素的毕赤酵母菌，这为菌丝霉素的工业化生产和研发新型绿色的饲料添加剂奠定了基础。
Abstract:
-

参考文献/References:

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备注/Memo

备注/Memo:
收稿日期：2019-11-03
基金项目：佛山市生物活性肽工程技术研究中心项目(编号：2017GA00022)；广东省教育厅高校科研项目(编号：2017GCZX006)。
作者简介：邓赣奇(1995—)，男，江西赣州人，硕士研究生，从事动物营养研究。E-mail：dengganqi@foxmail.com。
通信作者：刘燊，博士，副教授，主要从事动物生物技术与动物营养研究。E-mail：shencn@aliyun.com。
更新日期/Last Update: 2020-09-20