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[1]韩凯凯,严若峰,刘青涛,等.鸭坦布苏病毒甲基转移酶的真核表达及鉴定[J].江苏农业科学,2021,49(15):147-150.
　Han Kaikai,et al.Eukaryotic expression and identification of methyltransferase of duck Tembusu virus[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2021,49(15):147-150.
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鸭坦布苏病毒甲基转移酶的真核表达及鉴定(PDF)
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《江苏农业科学》[ISSN:1002-1302/CN:32-1214/S]

卷:
第49卷
期数:
2021年第15期
页码:
147-150
栏目:
畜牧兽医与水产蚕桑
出版日期:
2021-08-05

文章信息/Info

Title:
Eukaryotic expression and identification of methyltransferase of duck Tembusu virus
作者:
韩凯凯1; 2; 3; 严若峰1; 刘青涛1; 2; 3; 刘宇卓2; 李银1; 2; 3; 赵冬敏1; 2; 3; 黄欣梅1; 2; 3; 杨婧2
1.南京农业大学动物医学院，江苏南京 210095； 2.江苏省农业科学院兽医研究所，江苏南京 210014；3.江苏大学生命科学学院，江苏镇江 212013
Author(s):
Han Kaikai; et al
关键词:
鸭坦布苏病毒; 甲基转移酶; 真核表达
Keywords:
-
分类号:
S852.65+7
DOI:
-
文献标志码:
A
摘要:
甲基转移酶(methyltransferase，MTase)是鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus，DTMUV)非结构蛋白5的重要功能基团，在病毒复制及致病过程中发挥重要作用。为了对鸭坦布苏病毒甲基转移酶进行真核表达，并对其生物学功能进行鉴定，以GenBank中收录的DTMUV JS804株基因序列为模板，设计针对MTase的特异性引物，提取TMUV RNA，反转录得到cDNA，以其为模板进行扩增，得到MTase的基因片段，然后亚克隆至pCMV-Flag真核表达载体中，构建重组质粒pCMV-Flag-MTase，提取去除内毒素的重组质粒，并转染至BHK-21细胞，通过间接免疫荧光观察和Western Blot鉴定该蛋白的表达。结果显示，质粒pCMV-Flag-MTase经双酶切鉴定证明构建正确，通过间接免疫荧光与Western Blot检测，重组质粒在BHK-21细胞内正常表达，表达的蛋白与天然坦布苏病毒MTase具有相同的反应原性。
Abstract:
-

参考文献/References:

［1］吴双，姜勇，徐建生，等. 鸭坦布苏病毒、鸭肠炎病毒和番鸭细小病毒TaqMan三重实时荧光定量PCR检测方法的建立与临床应用［J］. 江苏农业学报，2020，36(3)：626-633.
［2］杨志远，段会娟，王小蕾，等. 4株鸭坦布苏病毒的毒力、E基因序列和抗原差异性［J］. 中国农业科学，2019，52(23)：4406-4414.
［3］Egloff M P，Benarroch D，Selisko B，et al. An RNA cap (nucleoside-2′-O-)-methyltransferase in the flavivirus RNA polymerase NS5：crystal structure and functional characterization［J］. The EMBO Journal，2002，21(11)：2757-2768.
［4］Geiss B J，Thompson A A，Andrews A J，et al. Analysis of flavivirus NS5 methyltransferase cap binding［J］. Journal of Molecular Biology，2009，385(5)：1643-1654.
［5］Zhou H，Wang F，Wang H，et al. The conformational changes of Zika virus methyltransferase upon converting SAM to SAH［J］. Oncotarget，2017，8(9)：14830-14834.
［6］周希珍，赵慧，高岚，等. 虫媒黄病毒NS5蛋白的生物学功能研究进展［J］. 军事医学，2012，36(1)：70-72.
［7］Dong H，Zhang B，Shi P Y. Flavivirus methyltransferase：a novel antiviral target［J］. Antiviral Research，2008，80(1)：1-10.

相似文献/References:

[1]曹宗喜,贺冬梅,叶保国,等.鸭坦布苏病毒的分离和PCR鉴定[J].江苏农业科学,2017,45(05):152.
　Cao Zongxi,et al.Isolation and PCR identification of duck Tembusu virus[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2017,45(15):152.
[2]赵亮,狄佳春,陈旭升.棉花基因组中SABATH甲基转移酶基因家族的查找与分析[J].江苏农业科学,2018,46(17):38.
　Zhao Liang,et al.Screening and analysis of SABATH methyltransferase gene family in cotton genome[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2018,46(15):38.

备注/Memo

备注/Memo:
收稿日期：2020-12-16
基金项目：国家自然科学基金(编号：31502101)；江苏省农业科技自主创新资金［编号：CX(20)3093］。
作者简介：韩凯凯(1983—)，男，河南新乡人，博士，副研究员，主要从事水禽疫病防控相关研究。E-mal：hankk0917@126.com。
更新日期/Last Update: 2021-08-05