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《江苏农业科学》[ISSN:1002-1302/CN:32-1214/S]

卷:

第50卷

期数:

2022年第1期

页码:

40-44

栏目:

生物技术

出版日期:

2022-01-05

文章信息/Info

Title:

Construction and expression of prokaryotic expression vector of H9N2 subtype avian influenza virus NS1 protein

作者:

马平¹; 2; 杨婧¹; 刘宇卓¹; 李银¹; 黄欣梅¹; 赵冬敏¹; 韩凯凯¹; 章丽娇¹; 刘青涛¹

1. 江苏省农业科学院兽医研究所，江苏南京 210014； 2.南京农业大学动物医学院，江苏南京 210095

Author(s):

Ma Ping; et al

关键词:

禽流感病毒; NS1蛋白; 原核表达; 蛋白纯化; 蛋白免疫印迹

Keywords:

-

分类号:

S852.65⁺7

DOI:

-

文献标志码:

A

摘要:

为对H9N2亚型禽流感病毒(AIVs)NS1基因进行原核表达，并对表达产物进行抗原性分析，根据NS1基因合成1对特异性引物，进行PCR扩增，将扩增片段连接至PMD18-T载体，通过序列测定和比对筛选出保真基因克隆；将保真基因克隆至pET32a表达载体，构建重组质粒pET32a-NS1后转化至大肠杆菌BL21(DE3)中，加入IPTG进行诱导表达；并对IPTG使用浓度和诱导时间进行优化，对表达的重组蛋白用His-tag镍柱进行纯化，利用Western Blot和免疫荧光技术对纯化的重组蛋白进行鉴定及免疫原性的测定。结果显示，本试验成功扩增出H9N2 AIVs的NS1基因，并筛选到保真克隆；带有NS1保真基因的重组载体pET32a-NS1可在大肠杆菌中进行IPTG诱导表达，其中，IPTG最佳使用浓度为2 mmol/L、最佳诱导时间为8 h时表达量最大，并且表达产物主要存在于包涵体中；纯化后的重组蛋白可被抗His标签识别，利用重组蛋白制备的抗体可识别H9N2 AIVs在细胞内表达的NS1蛋白，说明重组蛋白具有良好的免疫原性，该试验为H9N2 AIVs NS1蛋白的功能特性和免疫学研究奠定了基础。

Abstract:

-

参考文献/References:

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备注/Memo

备注/Memo:

收稿日期：2021-06-03
基金项目：国家自然科学基金面上项目(编号：31972691)。
作者简介：马平(1997—)，女，江苏南通人，硕士研究生，主要从事家禽疫病研究工作。E-mail：1204383706@qq.com。
通信作者：刘青涛(1981—)，男，山东滨州人，博士，副研究员，主要从事家禽疫病致病机制与免疫防控技术研究。E-mail：taoqingliu2013@163.com。

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更新日期/Last Update: 2022-01-05