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《江苏农业科学》[ISSN:1002-1302/CN:32-1214/S]

卷:

第53卷

期数:

2025年第6期

页码:

196-201

栏目:

畜牧兽医与水产蚕桑

出版日期:

2025-03-20

文章信息/Info

Title:

Preliminary study on function of ATP5B in regulating the formation of chicken primordial germ cells

作者:

孙长花¹; 2; 赵娟娟²; 姚泽令²

1.扬州市职业大学生物与化工工程学院，江苏扬州 225009； 2.扬州大学动物科学与技术学院，江苏扬州 225009

Author(s):

Sun Changhua; et al

关键词:

鸡; ATP合成酶亚基β基因; 胚胎干细胞; 分化; 原始生殖细胞

Keywords:

-

分类号:

S831.2

DOI:

-

文献标志码:

A

摘要:

为了研究ATP5B在鸡原始生殖细胞(PGCs)形成过程中的具体功能，通过构建家鸡ATP5B的短发夹RNA (shRNA)的慢病毒干扰载体，制备低表达ATP5B的鸡胚胎干细胞(ESCs)株，并对ATP5B在ESCs分化为PGCs过程中的功能进行研究。依据家鸡ATP5B的转录本设计2个RNA干扰靶点以构建ATP5B干扰载体，通过qRT-PCR方法检测各靶点对ATP5B的干扰效率，筛选出干扰效率最高的shRNA干扰载体，并进行慢病毒包装。利用ATP5B的慢病毒载体侵染ESCs后进行视黄酸(RA)诱导，观察细胞的形态变化，并收集各组不同时间的细胞，通过qRT-PCR、流式细胞术和间接免疫荧光等方法检测PGCs的形成效率以及生殖相关的标记基因相对表达量变化。结果表明，ATP5B干扰载体被成功构建，分别命名为shATP5B-1、shATP5B-2，其中shATP5B-2干扰效率高。ATP5B低表达的ESCs细胞株，体外利用RA诱导，6 d后观察发现PGCs样细胞明显增多，且C-kit 和Cvh等PGCs形成标记基因的表达极显著上升(P＜0.01)，而Oct4和Nanog等多能性标记基因的表达则极显著下降(P＜0.01)。ATP5B表达抑制后，CVH标记阳性细胞比率极显著高于对照组(P＜0.01)。本研究成功制备了ATP5B低表达的ESCs细胞株，证实ATP5B可以作为ESCs分化为PGCs的一个体外负向调控因子，为系统解析鸡PGCs的发生机制提供研究基础。

Abstract:

-

参考文献/References:

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备注/Memo

备注/Memo:

收稿日期：2024-12-31
基金项目：江苏省高校“青蓝工程”项目(编号：2022JS-29)；扬州市“英才培育计划”项目(编号：2020YZYC-098)；扬州市科技计划(编号：YZ2023217)；江苏省种植养殖业安全环境技术及装备工程研究中心项目(编号：苏发改高支发〔2020〕1460号；扬州市农产品智能测控与清洁生产工程技术研究中心项目(编号：YZM2022127)；江苏省高等学校优秀科技创新团队项目(编号：苏教科〔2021〕1号)。
作者简介：孙长花(1982—)，女，江苏南京人，博士，副教授，主要从事食品与生物技术研究。E-mail：101762@yzpc.edu.cn。

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更新日期/Last Update: 2025-03-20