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[1]王锐丽,刘敏杰,薛业敏.多功能融合酶基因Linker的优化及表达[J].江苏农业科学,2016,44(04):31-36.
　Wang Ruili,et al.Optimization and expression of multifunctional fusion enzyme gene linker[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2016,44(04):31-36.
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多功能融合酶基因Linker的优化及表达(PDF)
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《江苏农业科学》[ISSN:1002-1302/CN:32-1214/S]

卷:
第44卷
期数:
2016年04期
页码:
31-36
栏目:
生物技术
出版日期:
2016-04-25

文章信息/Info

Title:
Optimization and expression of multifunctional fusion enzyme gene linker
作者:
王锐丽1;  刘敏杰1;  薛业敏2
1.信阳农林学院生物技术系，河南信阳 464000；2.南京师范大学金陵女子学院，江苏南京 210097
Author(s):
Wang Ruili; et al
关键词:
多功能性酶; 基因融合; 木糖苷酶/阿拉伯糖苷酶; 木聚糖酶; 连接肽
Keywords:
-
分类号:
Q786
DOI:
-
文献标志码:
A
摘要:
在融合酶阿拉伯/木糖苷酶-木聚糖酶(Xar-xynA)之间插入不同组成和长度的多肽Linker，避免催化结构域相互之间的干扰，改善融合酶的催化效率。5个含不同长度及Ala/Gly比例连接肽Linker的融合突变体在大肠杆菌重组表达、纯化，并对融合酶的酶学性质、动力学参数和酶解作用进行研究。结果表明，融合酶Xar-L1/L2/L3-xynA和融合酶Xar-xynA有着相似的最适温度和最适pH值。其中融合酶Xar-L1-xynA在65~80 ℃和pH值6.6~8.2有更强的阿拉伯/木糖苷酶热稳定性和pH值稳定性，将融合酶Xar-L1-xynA在65 ℃保温60 min其阿拉伯/木糖苷酶活性有着明显的激活现象。并获得连接Xar和XynA的最优Linker：L1和L4，麦麸和玉米芯木聚糖产物酶解试验的结果表明，融合酶Xar-L1-xynA和Xar-L4-xynA比其他的融合酶有着更高的催化效率。
Abstract:
-

参考文献/References:

［1］Fan Z M，Wagschal K，Lee C C，et al. The construction and characterization of two xylan-degrading chimeric enzymes［J］. Biotechnology and Bioengineering，2009，102(3)：684-692.
［2］Fan Z M，Werkman J R，Yuan L. Engineering of a multifunctional hemicellulase［J］. Biotechnology Letters，2009，31(5)：751-757.
［3］沈艺红，薛业敏，侯静静，等. 耐热木聚糖酶和葡萄糖醛酸苷酶的共表达及应用［J］. 食品科学，2015，36(1)：146-152.
［4］Hammel M，Fierobe H P，Czjzek M，et al. Structural insights into the mechanism of formation of cellulosomes probed by small angle X-ray scattering［J］. Journal of Biological Chemistry，2004，279(53)：55985-55994.
［5］Carlsson H，Ljung S，Bülow L. Physical and kinetic effects on induction of various linker regions in beta-galactosidase/galactose dehydrogenase fusion enzymes［J］. Biochimica et Biophysica Acta，1996，1293(1)：154-160.
［6］Lu P，Feng M G. Bifunctional enhancement of a beta-glucanase-xylanase fusion enzyme by optimization of peptide linkers［J］. Applied Microbiology and Biotechnology，2008，79(4)：579-587.
［7］Yin E K，Le Y L，Pei J J，et al. High-level expression of the xylanase from Thermomyces lanuginosus in Escherichia coli［J］. World Journal of Microbiology and Biotechnology，2008，24(2)：275-280.
［8］Mai V，Wiegel J，Lorenz W W. Cloning，sequencing，and characterization of the bifunctional xylosidase-arabinosidase from the anaerobic thermophile thermoanaerobacter ethanolicus［J］. Gene，2000，247(1/2)：137-143.
［9］Sambrook J，Fritsch E F，Maniatis T. Molecular cloning：a laboratory manual［M］. New York：Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989.
［10］Xue Y M，Shao W L. Expression and characterization of a thermostable beta-xylosidase from the hyperthermophile，Thermotoga maritima［J］. Biotechnology Letters，2004，26(19)：1511-1515.
［11］薛业敏，毛忠贵，邵蔚蓝. 利用玉米芯木聚糖酶法制备低聚木糖的研究［J］. 中国酿造，2003(6)：7-9.
［12］欧仕益，李炎，高孔荣. 麦麸膳食纤维清除羟自由基的研究［J］. 营养学报，1999，21(2)：75-79.
［13］Goyal K，Jo Kim B，Kim J D，et al. Enhancement of transglycosylation activity by construction of chimeras between mesophilic and thermophilic beta-glucosidase［J］. Archives of Biochemistry and Biophysics，2002，407(1)：125-134. ［14］Singh A，Hayashi K. Construction of chimeric beta-glucosidases with improved enzymatic properties［J］. The Journal of Biological Chemistry，1995，270(37)：21928-21933.
［15］Arai R，Ueda H，Kitayama A，et al. Design of the linkers which effectively separate domains of a bifunctional fusion protein［J］. Protein Engineering，2001，14(8)：529-532.
［16］Hoedemaeker F J，Signorelli T，Johns K，et al. A single chain Fv fragment of P-glycoprotein-specific monoclonal antibody C219. Design，expression，and crystal structure at 2.4 A resolution［J］. Journal of Biological Chemistry，1997，272(47)：29784-29789.
［17］Kavoosi M，Creagh A L，Kilburn D G，et al. Strategy for selecting and characterizing linker peptides for CBM9-tagged fusion proteins expressed in Escherichia coli［J］. Biotechnology and Bioengineering，2007，98(3)：599-610.
［18］Robinson C R，Sauer R T. Optimizing the stability of single-chain proteins by linker length and composition mutagenesis［J］. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，1998，95(11)：5929-5934.
［19］George R A，Heringa J. An analysis of protein domain linkers：their classification and role in protein folding［J］. Protein Engineering，2002，15(11)：871-879.

相似文献/References:

备注/Memo

备注/Memo:
收稿日期：2015-02-08
基金项目：河南省科技攻关项目(编号：132102110047)
作者简介：王锐丽(1985—)，女，河南信阳人，硕士，讲师，研究方向为微生物学。E-mail：wrl0376@163.com。
更新日期/Last Update: 2016-04-25