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《江苏农业科学》[ISSN:1002-1302/CN:32-1214/S]

卷:

第47卷

期数:

2019年第17期

页码:

186-189

栏目:

畜牧兽医与水产蚕桑

出版日期:

2019-09-29

文章信息/Info

Title:

High-density fermentation and immune effect of recombinant Escherichia coli containing Clostridium putrificum α toxin and Clostridium perfringens ε toxin genes

作者:

彭小兵¹;  杜吉革¹;  彭国瑞¹;  李旭妮¹;  董令赢¹;  冯丽芳²;  蒋玉文¹

1.中国兽医药品监察所，北京 100081； 2.北京中海生物科技有限公司，北京 100081

Author(s):

Peng Xiaobing; et al

关键词:

腐败梭菌α毒素; 产气荚膜梭菌ε毒素; 大肠杆菌高密度发酵; 免疫效果; 抗原含量; 家兔; 绵羊

Keywords:

-

分类号:

S852.4⁺3

DOI:

-

文献标志码:

A

摘要:

为确定含腐败梭菌α毒素和产气荚膜梭菌ε毒素重组蛋白的生产效率并评价其作为抗原的免疫效果，用生物反应器对重组大肠杆菌DE3-pET-AE进行高密度发酵，并将其制苗后以不同抗原剂量分别接种家兔和绵羊，间隔21 d进行二免，分别测定一免、二免动物混合血清的中和效价。发酵结果显示，培养物菌体密度D_{600 nm}达20.3，相对表达量为27.6%，D_{600 nm}与相对表达量的乘积为摇瓶培养的6.5倍，菌体湿质量为37.2 g/L；十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示，目的蛋白以可溶形式表达。动物免疫效果评价结果显示，在家兔和绵羊上，抗原含量与免疫效果在一定的范围内均呈正相关，当接种量为300 μg/只时，免疫效果均最好；对腐败梭菌毒素与D型产气荚膜梭菌毒素的血清中和效价，在家兔上一免、二免分别达4与30、15与200，在绵羊上一免、二免分别达2与30、12与250。结果表明，DE3-pET-AE菌高密度发酵可获得高产量蛋白抗原，且抗原的免疫效果明显优于《中华人民共和国兽药典》合格标准。

Abstract:

-

参考文献/References:

［1］陈溥言. 兽医传染性学［M］. 北京：中国农业出版社，2007：194-196.
［2］彭小兵，李旭妮，蒋玉文，等. 腐败梭菌类毒素抗原含量与免疫效果之间的关系研究［J］. 中国兽医杂志，2016，52(4)：6-8.
［3］Amimoto K，Ohgitani T，Sasaki O，et al. Protective effect of Clostridium septicum alpha-toxoid vaccine against challenge with spores in Guinea pigs［J］. Journal of Veterinary Medical Science，2002，64(1)：67-69.
［4］Lancto C A，Foster L K，Kromm M M，et al. A noncytolytic alpha toxin recombinant protein protects turkeys against Clostridium septicum challenge［J］. Avian Diseases，2014，58(4)：566-571.
［5］Ferreira M R，Moreira G M，Da Cunha C E，et al. Recombinant alpha，beta，and epsilon toxins of Clostridium perfringens：production strategies and applications as veterinary vaccines［J］. Toxins，2016，8(11)：1-24.
［6］农业部兽用生物制品规程委员会. 中华人民共和国兽用生物制品规程［S］. 北京：化学工业出版社，2000：41-51.
［7］Studier F W. Protein production by auto-induction in high density shaking cultures［J］. Protein Expression and Purification，2005，41(1)：207-234.
［8］中国兽药典委员会. 中华人民共和国兽药典(三部)［S］. 北京：中国农业出版社，2016：44-49.
［9］陈理，俞昌喜. 重组大肠杆菌高密度发酵工艺进展［J］. 海峡药学，2011，23(3)：15-18.
［10］张建新，张吨，胡文波，等. 重组大肠杆菌高细胞密度发酵研究进展［J］. 中国酿造，2011，227(2)：5-8.
［11］Animal and plant health inspection service，USDA. 9 CFR Ch.I(1-1-07 Edition)［M］. Washington：U.S.Government Printing Office，2007：688-698.
［12］British pharmacopoeia(Veterinary)［M］. London：the Stationery Office，2005：192-199.

相似文献/References:

备注/Memo

备注/Memo:

收稿日期：2018-05-22
基金项目：国家重点研发计划(编号：2017YFD0500905)；中国兽医药品监察所所级课题(编号：201701)。
作者简介：彭小兵(1983—)，男，江苏泗洪人，硕士，副研究员，主要从事细菌类生物制品的研究。Tel：(010)62106555；E-mail：pengxiaobing@ivdc.org.cn。
通信作者：蒋玉文，博士，研究员，主要从事细菌类生物制品的研究。E-mail：jiangyuwen@ivdc.org.cn。

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更新日期/Last Update: 2019-09-05