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《江苏农业科学》[ISSN:1002-1302/CN:32-1214/S]

卷:

第48卷

期数:

2020年第20期

页码:

62-67

栏目:

生物技术

出版日期:

2020-10-20

文章信息/Info

Title:

Construction，expression and purification of HY5p gene prokaryotic expression vector of “Yunhongli No.1”

作者:

苏俊¹; 陈璐²; 马伟荣³; 杨谨⁴; 黄兴龙⁵; 陈霞¹; 舒群¹

1.云南农业科学研究院园艺作物研究所，云南昆明650205； 2.云南农业大学园林园艺学院，云南昆明650200；
3.云南省红河州经济作物技术推广站，云南红河654400 ；4.云南省农业科学院经济作物研究所，云南昆明650205；
5.石林县经济作物站，云南石林652200

Author(s):

Su Jun; et al

关键词:

HY5基因; 云红梨1号; 原核表达载体; 诱导表达; 纯化

Keywords:

-

分类号:

S661.201

DOI:

-

文献标志码:

A

摘要:

HY5为调控光形态建成的转录因子，调控花青素的生物合成与累积。通过构建云红梨1号HY5基因的原核表达载体，旨在为研究HY5蛋白的生物功能奠定基础。将云红梨1号的HY5基因构建到原核表达载体pGEX-4T-1上，并对其进行诱导表达，通过谷胱甘肽-S-转移酶(GST)亲和层析色谱柱纯化融合蛋白。结果表明，重组质粒pGEX-4T-1-PyHY5的酶切检测及测序结果均正确，表明重组质粒载体构建成功。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示，用100 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在37 ℃、220 r/min条件下诱导3 h后收集诱导菌株，在BL21菌株中均有明显的目的条带，诱导表达后的融合蛋白大小约为43.90 ku；PyHY5蛋白能够与pGEX-4T-1载体上的GST标签蛋白进行融合表达。通过研究成功构建了pGEX-4T-1-PyHY5原核表达载体，诱导表达并纯化出PyHY5融合蛋白为进一步研究其生物学功能奠定了基础。

Abstract:

-

参考文献/References:

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相似文献/References:

备注/Memo

备注/Memo:

收稿日期：2019-12-30
基金项目：国家自然科学基金地区科学基金(编号：31760562)；国家重点研发计划(编号：2018YFD0201400)；云南省重大科技专项(编号：2019ZG002)；云南省科技计划(编号：2017FB062)；云南省技术创新人才培养计划(编号：2015HB101)；现代农业产业技术体系建设专项资金(编号：CARS-28-20)。
作者简介：苏俊(1980—)，男，云南大理人，硕士，研究员，主要从事梨育种、栽培生理及品质调控等方面的研究。E-mail：57470058@qq.com。
通信作者：舒群，研究员，研究方向为果树育种及栽培技术。E-mail：1057139643@qq.com。

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更新日期/Last Update: 2020-11-09