«上一篇/Previous Article|本期目录/Table of Contents|下一篇/Next Article»

《江苏农业科学》[ISSN:1002-1302/CN:32-1214/S]

卷:

第44卷

期数:

2016年06期

页码:

41-45

栏目:

生物技术

出版日期:

2016-06-25

文章信息/Info

Title:

Expressing prediction of plant expression vector in desert chlorella

作者:

汪文伦;  王丹;  牟云;  许万云;  胡梦薇;  高剑峰

石河子大学生命科学学院，新疆石河子 832003

Author(s):

Wang Wenlun; et al

关键词:

沙漠小球藻; 电转化; 植物表达载体; 绿色荧光蛋白

Keywords:

-

分类号:

S917.1

DOI:

-

文献标志码:

A

摘要:

以建立小球藻(沙漠小球藻)表达系统为目的，为利用小球藻重组表达外源蛋白，以及GFP荧光特性研究沙漠中的小球藻生理及理化性质提供基础方法；同时也探索植物表达载体pCAMBIA2300-35S-OCS能否在沙漠小球藻中表达。通过菌落PCR验证E.coli DH5α是否含有目的基因(GFP基因)的重组植物表达载体pCAMBIA2300-35S-GFP-OCS，然后从E.coli DH5α中提取也构建完成的重组植物表达载体pCAMBIA2300-35S-GFP-OCS；利用电转化的方法将重组植物表达载体pCAMBIA2300-35S-GFP-OCS转入到小球藻细胞中；将电转的小球藻在含有 100 mg/L 卡那霉素的BBM固体培养基中筛选出单克隆，将单克隆在含有15 mg/L卡那霉素的BBM液体培养基中扩大培养，然后利用PCR和RT-PCR预测绿色荧光蛋白基因(GFP基因)的存在与否和表达情况，再利用SDS-PAGE和荧光倒置显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况。通过SDS-PAGE和荧光倒置显微镜观察结果表明绿色荧光蛋白(GFP)在小球藻中表达成功。试验结果表明重组植物表达pCAMBIA2300-35S-OCS能够在小球藻中表达外源蛋白，以及利用GFP的荧光特性研究小球藻的生理生化差异；也为小球藻在沙漠环境上的应用提供基础。

Abstract:

-

参考文献/References:

［1］朱军保，王丹，汪文伦，等. 4株沙漠小球藻对几种常用抗生素的敏感性研究［J］. 生物技术通讯，2014，25(6)：837-841.
［2］陈钧杰，蒋进，付恒飞，等. 古尔班通古特沙漠腹地土壤水分动态［J］. 干旱区地理，2009，32(4)：537-543.
［3］赵建成，张丙昌，张元明. 新疆古尔班通古特沙漠生物结皮绿藻研究［J］. 干旱区研究，2006，23(2)：189-194.
［4］El-Sheekh M M. Stable transformation of the intact cells of clorella kessleri with hight velocity microprojectiles［J］. Biologia Plantarum，1999，42(2)：209-216.
［5］Chat S，Yee W，Aziz A. Assessment of factors affecting Agrobacterium-mediated geneti-transformation of the unicellular green alga，chlorella vulgaris［J］. World Journal of Microbiology & Biotechnology，2012，28(4)：1771-1779.
［6］Huang C C，Chen M W，Hsieh J L，et al. Expression of mercuric reductase from Bacillus megaterium MB1 in eukaryotic microalga Chlorella sp. DT：an approach for mercury phytoremediation［J］. Applied Microbiology and Biotechnology，2006，72(1)：197-205.
［7］Benfey P N，Ren L，Chua N H. Tissue-specific expression from CaMV 35S enhancer subdomains in early stages of plant development［J］. The EMBO Journal，1990，9(6)：1677-1684.
［8］Wang C H，Wang Y Y，Su Q，et al. Transient expression of the GUS gene in a unicellular marine green alga，Chlorella sp.MACC/C95，via electroporation［J］. Biotechnology and Bioprocess Engineering，2007，12(2)：180-183.
［9］Gambhir S S，Barrio J R，Hersehman H R，et al. Assays for noninvasive imaging of reporter gene expression［J］. Nucl Med Bio，1999，26：481-490. ［10］龚春霞，李芳芳，苟亚峰，等. 一株沙漠小球藻不同培养方式的比较［J］. 可再生能源，2013，31(11)：106-110，115.
［11］院海英，吴祥辉，东锐，等. GFP基因在新疆小拟南芥和拟南芥中的表达分析［J］. 西北植物学报，2012，32(5)：881-885.
［12］Misra N. Prasanna kumar panda and bikram kumar parida.Agrigenomics for microalgal biofuel production：an overview of various bioinformatics resources and recent studies to Link OMICS to bioenergy and bioeconomy［J］. OMICS-A Journal of Integrative Biology，2013，17(11)：537-549.
［13］Noor-Mohammadi S，Pourmir A，Johannes T W. Method for assembling and expressing multiple genes in the nucleus of microalgae［J］. Biotechnology Letters，2014，36：561-566.
［14］Rasala B A，Lee P A，Shen Zhouxin，et al. Robust expression and secretion of Xylanase1 in Chlamydomonas reinhardtii by fusion to a selection gene and processing with the FMDV 2A peptide［J］. PLoS One，2012，7(8)：e43349.
［15］Jiang Q，Zhao L，Dai J B，et al. Analysis of autophagy genes in microalgae：Chlorella as a potential model to study mechanism of autophagy［J］. PLoS One，2012，7(7)：e41826.
［16］Song D H，Li J，Hu X X，et al. Construction of a shuttle vector for heterologous gene expression in Escherichia coli and Microalgae anabaena［J］. Engineering，2013，5：540-544.
［17］Guo S L，Zhao X Q，Tang Y，et al. Establishment of an efficient genetic transformation system in scenedesmus obliquus［J］. Journal of Biotechnology，2013，163：61-68.

相似文献/References:

[1]于建宁,宋小敬,王公金,等.乳酸乳球菌电转化方法的优化[J].江苏农业科学,2013,41(08):34.
　Yu Jianning,et al.Optimization of electroporation method for Lactococcus lactis[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2013,41(06):34.

备注/Memo

备注/Memo:

收稿日期：2015-05-07
基金项目：国家重点基础研究发展计划(编号：2011-CB200900-G)。
作者简介：汪文伦(1988—)，男，贵州金沙人，硕士，主要从事可再生能源的开发与利用相关研究。E-mail：1019159335@qq.com。
通信作者：高剑峰。E-mail：jianfengg@shzu.edu.cn。

常用功能

更新日期/Last Update: 2016-06-25