|本期目录/Table of Contents|

[1]李维欢,吴小媚,武志健,等.青花菜自交不亲和相关内参基因筛选与应用[J].江苏农业科学,2025,53(2):34-43.
　Li Weihuan,et al.Screening and application of internal reference genes related to self-incompatibility in broccoli[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2025,53(2):34-43.
点击复制

青花菜自交不亲和相关内参基因筛选与应用(PDF)
分享到：

《江苏农业科学》[ISSN:1002-1302/CN:32-1214/S]

卷:
第53卷
期数:
2025年第2期
页码:
34-43
栏目:
生物技术
出版日期:
2025-01-20

文章信息/Info

Title:
Screening and application of internal reference genes related to self-incompatibility in broccoli
作者:
李维欢; 吴小媚; 武志健; 陈芳珍; 王军伟; 黄科
湖南农业大学园艺学院/蔬菜生物学湖南省重点实验室/园艺作物种质创新与新品种选育教育部工程研究中心/农业农村部园艺作物(蔬菜、茶叶等)基因资源评价利用重点实验室，湖南长沙 410128
Author(s):
Li Weihuan; et al
关键词:
青花菜; 自交不亲和; 内参基因; SRK
Keywords:
-
分类号:
S635.301
DOI:
-
文献标志码:
A
摘要:
为研究青花菜自交不亲和反应过程中最适内参基因与自交不亲和相关基因的表达，以青花菜自交不亲和系BOP04-28-16开花期分别取不同器官、花的不同组织部位、不同发育时期的花蕾和不同授粉时期柱头4个组合为试验材料，利用实时荧光定量PCR技术及3个RT-qPCR分析软件GeNorm、NormFinder和BestKeeper检测了17个候选内参基因分别在4个组合中的表达水平。结果表明，在不同组织部位中的稳定内参基因为UBC7、Actin-1、UBC9；在花的不同部位中稳定的内参基因为DNAJ、Tubα-3；在不同发育时期花蕾中稳定的内参基因为Actin-7、UBC7、Actin-3；在4个不同授粉时期柱头中稳定的内参基因为Actin-7、His。综合分析认为，UBC7和Actin-7为青花菜SI中最适合的内参基因组合，并以其分别分析青花菜柱头S位点受体激酶基因(SRK)在花的不同组织部位和不同授粉时期柱头的表达水平进行验证筛选的可靠性，结果显示SRK基因在柱头中特异表达，并且与柱头的发育成熟性成正相关。研究结果为开展青花菜自交不亲和相关基因的表达特征分析提供了稳定的内参基因，为后续开展关键基因的挖掘、利用以及自交不亲和分子调控网络解析奠定了基础。
Abstract:
-

参考文献/References:

［1］林俊城，吴秋云，高灿红，等. 青花菜硫、硒代谢竞争及其对保健功能的影响研究进展［J］. 中国细胞生物学学报，2011，33(4)：422-432.
［2］解鸿蕾，车文静，苏越， 等. 十字花科蔬菜的抗癌作用［J］. 食品安全导刊，2022(34)：172-175.
［3］李占省，戚如诗，刘玉梅，等. 我国青花菜生产布局、价格变化及趋势［J］. 长江蔬菜，2021(4)：1-5.
［4］吴名. 利用分子标记辅助选育甘蓝型油菜自交不亲和系［D］. 武汉：华中农业大学，2015.
［5］寇小培. 分子标记辅助选育甘蓝型油菜自交不亲和系［D］. 武汉：华中农业大学，2012.
［6］郑敏，朱陈曾，刘梦慈，等. 基于SRK基因序列分析的甘蓝自交不亲和系单倍型鉴定及验证［J］. 中国蔬菜，2018(3)：32-39.
［7］许明超，黄倩，张康妮，等. 甘蓝型油菜隐性细胞核雄性不育系LY31AB的选育及利用［J］. 浙江大学学报(农业与生命科学版)，2023，49(4)：507-515.
［8］Takasaki T，Hatakeyama K，Suzuki G，et al. The S receptor kinase determines self-incompatibility in Brassica stigma［J］. Nature，2000，403(6772)：913-916.
［9］Murase K，Shiba H，Iwano M，et al. A membrane-anchored protein kinase involved in Brassica self-incompatibility signaling［J］. Science，2004，303(5663)：1516-1519.
［10］Horisaki A，Niikura S. Developmental and environmental factors affecting level of self-incompatibility response in Brassica rapa L.［J］. Sexual Plant Reproduction，2008，21(2)：123-132.
［11］蓝兴国，杨佳，赵昕，等. 羽衣甘蓝ARC1的基因分离、表达及与SRK相互作用的分析［J］. 园艺学报，2011，38(12)：2342-2348.
［12］Kusaba M，Matsushita M，Okazaki K，et al. Sequence and structural diversity of the S locus genes from different lines with the same self-recognition specificities in Brassica oleracea［J］. Genetics，2000，154(1)：413-420.
［13］Schopfer C R，Nasrallah M E，Nasrallah J B，et al. The male determinant of self-incompatibility in Brassica［J］. Science，1999，286(5445)：1697-1700.
［14］魏小春，姚秋菊，原玉香，等. 大白菜高代自交系S单元型的分布［J］. 河南农业科学，2015，44(11)：109-113，119.
［15］Die J V，Román B，Nadal S，et al. Evaluation of candidate reference genes for expression studies in Pisum sativum under different experimental conditions［J］. Planta，2010，232(1)：145-53.
［16］Fu J X，Wang Y，Huang H，et al. Reference gene selection for RT-qPCR analysis of Chrysanthemum lavandulifolium during its flowering stages［J］. Molecular Breeding，2013，31(1)：205-215.
［17］王成. 不结球白菜自交不亲和相关基因及转录组分析［D］. 南京：南京农业大学，2017.
［18］江汉民，刘莉莉，徐嘉艺，等. 青花菜高代自交系S单元型的鉴定及SRK基因表达分析［J］. 南开大学学报(自然科学版)，2018，51(3)：60-65.
［19］Gachon C，Mingam A，Charrier B. Real-time PCR：what relevance to plant studies？［J］. Journal of Experimental Botany，2004，55(402)：1445-1454.
［20］袁伟，万红建，杨悦俭. 植物实时荧光定量PCR内参基因的特点及选择［J］. 植物学报，2012，47(4)：427-436.
［21］Albuquerque G M R，Fonseca F C A，Boiteux L S，et al. Stability analysis of reference genes for RT-qPCR assays involving compatible and incompatible Ralstonia solanacearum-tomato ‘Hawaii 7996’ interactions［J］. Scientific Reports，2021，11(1)：18719.
［22］孙静. 铁皮石斛qPCR内参基因的筛选及开花相关基因的表达分析［D］. 南京：南京师范大学，2017.
［23］Song J H，Yang J，Pan F，et al. Differential expression of micro RNAs may regulate pollen development in Brassica oleracea［J］. Genetics and Molecular Research，2015，14(4)：15024-15034.
［24］de Spiegelaere W，Dern-Wieloch J，Weigel R，et al. Reference gene validation for RT-qPCR，a note on different available software packages［J］. PLoS One，2017，10(3)：e0122515.
［25］Leelatanawit R，Saetung T，Phuengwas S，et al. Selection of reference genes for quantitative real-time PCR in postharvest tomatoes(Lycopersicon esculentum)treated by continuous low-voltage direct current electricity to increase secondary metabolites［J］. International Journal of Food Science & Technology，2017，52(9)：1942-1950.
［26］张颖，陈婉婷，陈冉红，等. 杉木实时荧光定量PCR分析中内参基因的选择［J］. 林业科学研究，2019，32(2)：65-72.
［27］Xiao X L，Ma J B，Wang J R，et al. Validation of suitable reference genes for gene expression analysis in the halophyte Salicornia europaea by real-time quantitative PCR［J］. Frontiers in Plant Science，2015，5(1)：788.
［28］Delporte M，Legrand G，Hilbert J L，et al. Selection and validation of reference genes for quantitative real-time PCR analysis of gene expression in Cichorium intybus［J］. Frontiers in Plant Science，2015，6(1)：651.
［29］左同鸿.甘蓝SI相关基因BoPUB3L和BoGSTL21的克隆与分析［D］. 重庆：西南大学，2020.
［30］张彤. 甘蓝型油菜自交不亲和反应候选基因的功能研究及挖掘［D］. 湖北：华中农业大学，2018.
［31］郭怡婷，孙世英，赵文菊，等. 球茎甘蓝qRT-PCR内参基因的筛选及稳定性验证［J］. 甘肃农业大学学报，2024，59(1)：144-152.
［32］李晗，李治龙，李晓屿，等. 羽衣甘蓝不同组织及柱头发育实时荧光定量PCR内参基因的筛选［J］. 植物研究，2016，36(4)：565-572.
［33］张冠，杨迎霞，陆国清，等. 花椰菜花球中花青素合成相关基因qRT-PCR内参基因的筛选［J］. 分子植物育种，2024，22(9)：2938-2946.
［34］Yan X，Zhang Q L，Zou J，et al. Selection of optimized reference genes for qRT-PCR normalization in Xanthomonas campestris pv. campestris cultured in different media［J］. Current Microbiology，2019，76(5)：613-619.
［35］Vandesompele J，de Preter K，Pattyn F，et al. Accurate normalization of real-time quantitative RT-PCR data by geometric averaging of multiple internal control genes［J］. Genome Biology，2002，3(7)：RESEARCH0034.
［36］Andersen C L，Jensen J L，rntoft T F. Normalization of real-time quantitative reverse transcription-PCR data：a model-based variance estimation approach to identify genes suited for normalization，applied to bladder and colon cancer data sets［J］. Cancer Research，2004，64(15)：5245-5250.
［37］Pfaffl M W，Tichopad A，Prgomet C，et al. Determination of stable housekeeping genes，differentially regulated target genes and sample integrity：BestKeeper-Excel-based tool using pair-wise correlations［J］. Biotechnology Letters，2004，26(6)：509-515.
［38］吴建阳，何冰，杜玉洁，等. 利用geNorm、NormFinder和BestKeeper软件进行内参基因稳定性分析的方法［J］. 现代农业科技，2017(5)：278-281.
［39］杨琳. 受体激酶SRK与FERONIA调控大白菜远缘杂交生殖隔离的分子机制［D］. 山东：山东农业大学，2023.
［40］张以忠，曾文艺，邓琳琼，等. 甘蓝S-位点基因SRK、SLG和SP11/SCR密码子偏好性分析［J］. 作物学报，2022，48(5)：1152-1168.
［41］Chen W D，Zhang B，Ren W J，et al. An identification system targeting the SRK gene for selecting S-haplotypes and self-compatible lines in cabbage［J］. Plants，2022，11(10)：1372-1372.
［42］裴徐梨，冯鹏宇，唐征，等. 青花菜花蕾发育LncRNAs内参基因筛选［J］. 河南农业科学，2023，52(1)：125-133.
［43］裴徐梨，焦鹏，荆赞革，等. 非生物胁迫下青花菜LncRNA内参基因的筛选［J］. 西北农业学报，2023，32(4)：593-599.
［44］Zeng A S，Xu Y Y，Song L X，et al. Validation of suitable reference genes for qRT-PCR in cabbage(Brassica oleracea L.)under different abiotic stress experimental conditions［J］. Journal of Plant Biochemistry and Biotechnology，2021，30(1)：184-195.
［45］李浩霞，黄稳娥，柳西宁，等. 枸杞实时荧光定量RT-qPCR内参基因筛选与验证［J］. 江苏农业科学，2023，51(9)：41-51.
［46］穆德添，万凌云，章瑶，等. 钩藤管家基因筛选及生物碱合成相关基因的表达分析［J］. 生物技术通报，2023，39(2)：126-138.
［47］Lee J M，Roche J R，Donaghy D J，et al. Validation of reference genes for quantitative RT-qPCR studies of gene expression in perennial ryegrass(Lolium perenne L.)［J］. BMC Molecular Biology，2010，11(1)：8.
［48］Li H，Qin Y，Xiao X，et al. Screening of valid reference genes for real-time RT-qPCR data normalization in Hevea brasiliensis and expression validation of a sucrose transporter gene HbSUT3［J］. Plant Science，2011，181(2)：132-139.

相似文献/References:

[1]邓艳美,王红妹,万从庆.青花菜中硫代葡萄糖苷的提取工艺[J].江苏农业科学,2013,41(06):254.
　Deng Yanmei,et al.Extraction technology of glucosinolates from broccoli[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2013,41(2):254.
[2]秦文斌,戴忠良,张振超,等.应用轮回选择改良青花菜侧花茎长度[J].江苏农业科学,2013,41(07):132.
　Qin Wenbin,et al.Lengthening of broccoli (Brassica oleracea var. italica) lateral scape length by recurrent selection[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2013,41(2):132.
[3]赵志刚.人工合成的甘蓝型油菜自交亲和性分析[J].江苏农业科学,2013,41(08):95.
　Zhao Zhigang.Self-compatibility analysis of artificially synthetic Brassica napus L.[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2013,41(2):95.
[4]戴忠良,张振超,潘永飞,等.青花菜新品种瑞绿5号的选育[J].江苏农业科学,2013,41(10):94.
　Dai Zhongliang,et al.Breeding of new Brassica oleracea var. italica cultivar “Ruilü No.5”[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2013,41(2):94.
[5]荆赞革,裴徐梨,唐征,等.青花菜早中熟种质资源遗传多样性SRAP标记分析[J].江苏农业科学,2014,42(01):41.
　Jing Zange,et al.Genetic diversity analysis of early-mid mature broccoli germplasm by SRAP marker[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2014,42(2):41.
[6]马越,丁云花,刘光敏,等.青花菜花球及叶片中硫代葡萄糖苷组分及含量分析[J].江苏农业科学,2016,44(07):300.
　Ma Yue,et al.Analysis of glucosinolate composition and contents in flowers and leaves of broccoli (Brassica oleracea L. var. botrytis L.)[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2016,44(2):300.
[7]滕昀,陈奎,刘雯倩,等.不同装箱方式对适宜温度下青花菜商品苗贮运质量的影响[J].江苏农业科学,2018,46(02):100.
　Teng Yun,et al.Effects of different packing methods on storage and transportation quality of broccoli seedlings under suitable temperature[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2018,46(2):100.
[8]宋立晓,侯忠乐,任一鸣,等.利用PEI-SWNT介导的瞬时转化检测青花菜基因编辑效率[J].江苏农业科学,2021,49(13):56.
　Song Lixiao,et al.Detection of gene editing efficiency in broccoli by PEI-SWNT mediated transient transformation[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2021,49(2):56.
[9]宋立晓,曾爱松,高兵,等.青花菜新品种苏青3号的选育[J].江苏农业科学,2014,42(12):216.
　Song Lixiao,et al.Breeding of new broccoli cultivar “Suqing No.3”[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2014,42(2):216.

备注/Memo

备注/Memo:
收稿日期：2024-01-31
项目基金：国家自然科学基金(编号：32072585、32072568、32272747、32272709)；国家重点研发计划(编号：2022YFF1003000、2022YFE0108300)。
作者简介：李维欢(1998—)，女，陕西咸阳人，硕士研究生，主要从事青花菜分子生物学研究。E-mail：1715783347@qq.com。
通信作者：黄科，博士，教授，主要从事十字花科蔬菜研究。E-mail：huangkeqy@hotmail.com。
更新日期/Last Update: 2025-01-20