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《江苏农业科学》[ISSN:1002-1302/CN:32-1214/S]

卷:

第48卷

期数:

2020年第10期

页码:

80-85

栏目:

生物技术

出版日期:

2020-05-20

文章信息/Info

Title:

Establishment and optimization of ISSR-PCR reaction system for mulberry

作者:

刘 玲¹;  唐仕成¹;  郑 丹²;  柯皓天²;  吕 银²

1.四川省丝绸工程技术研究中心，四川成都 610031； 2.四川省丝绸科学研究院，四川成都 610031

Author(s):

Liu Ling; et al

关键词:

桑树; 正交试验设计; ISSR-PCR; 反应体系优化

Keywords:

-

分类号:

S888.2

DOI:

-

文献标志码:

A

摘要:

采用正交试验设计L₁₆(4⁵)对桑树ISSR-PCR反应体系中的模板DNA、引物、Mg²⁺、dNTPs和rTaq酶5个因素及反应程序中变性时间、退火时间、延伸时间和循环数进行优化分析。结果表明，各因素水平变化对反应体系的影响大小依次为DNA模板>rTaq酶>Mg²⁺>引物>dNTPs。最终确立了最佳反应体系，即在10 μL反应体系中，含25 ng/μL DNA模板1 μL、10×PCR buffer 1 μL、20 μmol/L引物0.2 μL、2.5 mmol/L Mg²⁺ 0.8 μL、2.5 mmol/L dNTPs 1 μL、5 U/μL rTaq 0.1 μL。优化得到的反应程序为94 ℃预变性5 min；94 ℃变性40 s，合适的退火温度退火45 s，72 ℃ 延伸90 s，40个循环；72 ℃延伸10 min，16 ℃保存。通过梯度PCR，确定引物ID37的退火温度为49.5 ℃。稳定性检测表明该体系能用于桑树ISSR分析。

Abstract:

-

参考文献/References:

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备注/Memo

备注/Memo:

收稿日期：2019-05-15
基金项目：四川省科技计划(编号：2019YJ0291)。
作者简介：刘 玲(1989—)，女，山西大同人，硕士，工程师，主要从事桑树分子标记工作。E-mail：liuling1022@yeah.net。

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更新日期/Last Update: 2020-05-20