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《江苏农业科学》[ISSN:1002-1302/CN:32-1214/S]

卷:

第49卷

期数:

2021年第12期

页码:

45-50

栏目:

生物技术

出版日期:

2021-06-20

文章信息/Info

Title:

Study on phosphoenolpyruvate carboxykinase and enolase of Microbulbifer sp. A4B-17 strain

作者:

刘曹彤; 陆依琳; 徐慧; 彭学

江苏师范大学生命科学学院，江苏徐州 221116

Author(s):

Liu Caotong; et al

关键词:

对羟基苯甲酸; 磷酸烯醇式丙酮酸; 烯醇化酶; 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶

Keywords:

-

分类号:

S188⁺.3

DOI:

-

文献标志码:

A

摘要:

对羟基苯甲酸(4-Hydroxybenzoate，4HBA)应用广泛，在工业领域上被当作前体合成各种芳香族化合物，其中包括液晶材料、农药等；在食品和化妆品等领域上被当作防腐剂。微泡菌属(Microbulbifer sp.) A4B-17是一种能将葡萄糖合成4HBA的海洋细菌，为了提高4HBA的合成效率对合成莽草酸途径前体的2个关键酶：GM004356编码的磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(Phosphoenolpyruvate carboxykinase，PEPCK)和GM0031333编码的烯醇化酶(Enolase)进行研究。通过构建蛋白系统进化树发现，PEPCK与Microbulbifer sp. GL-2的PEPCK相似度为95.15%，Enolase与Microbulbifer variabilis的Enolase相似度为98.13%。利用低温表达载体在大肠杆菌中对2个酶进行高效表达，提取和纯化后，采用BCA法蛋白定量计算后得到纯化后的PEPCK和Enolase分别占各自粗酶液的1.304%和1.123%。酶活采用PK/LDH(丙酮酸激酶/乳酸脱氢酶)偶联检测法检测NADPH的减少量。根据米氏常数双倒数法求得PEPCK和Enolase的K_m值分别为0.041 mmol/L和0.056 mmol/L，PEPCK反应的最适温度为30 ℃，最适pH值为7，Enolase的最适温度为 30 ℃，最适pH值为7。以上结果为高效生产4HBA提供了理论依据。

Abstract:

-

参考文献/References:

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相似文献/References:

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备注/Memo

备注/Memo:

收稿日期：2020-11-04
基金项目：江苏师范大学科研创新计划校立项目(编号：2020XKT485)。
作者简介：刘曹彤(1996—)，女，江苏淮安人，硕士研究生，主要从事环境微生物学研究。E-mail：3220859786@qq.com。
通信作者：彭学，博士，教授，主要从事环境微生物学研究。E-mail：pengxue@jsnu.edu.cn。

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更新日期/Last Update: 2021-06-20