[1]汤玥,何浩波,何凯,等.产L-蛋氨酸基因工程菌株的构建[J].江苏农业科学,2020,48(22):37-43.
　Tang Yue,et al.Construction of L-methionine producing genetic engineering strain[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2020,48(22):37-43.
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产L-蛋氨酸基因工程菌株的构建()

《江苏农业科学》[ISSN:1002-1302/CN:32-1214/S]

卷:
第48卷
期数:
2020年第22期
页码:
37-43
栏目:
生物技术
出版日期:
2020-11-20

文章信息/Info

Title:
Construction of L-methionine producing genetic engineering strain
作者:
汤玥;  何浩波;  何凯;  陈馨茹;  胡翠英;  姚雪梅;  李良智
苏州科技大学，江苏苏州 205009
Author(s):
Tang Yue; et al
关键词:
L-蛋氨酸; 基因工程; 芽孢杆菌; metI基因; 蛋氨酸产量
Keywords:
-
分类号:
S188
DOI:
-
文献标志码:
A
摘要:
以野生型蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus) EN34为出发菌株，增强胱硫醚γ-合成酶基因(metI)表达，敲除或弱化腺苷蛋氨酸合成酶的编码基因metK，分析这2个基因的改变对蛋氨酸产量的影响。从枯草芽孢杆菌基因组中扩增P43强启动子，连接到pEB03质粒，利用重组连接的方法，将metI从Bacillus cereus EN34扩增重组连接到质粒，构建成pEB03-P43-SD-metI，通过电击转化到Bacillus cereus EN34，获得Bacillus cereus EN34(pEB03-P43-SD-metI)菌株。通过Bacillus cereus EN34扩增metK基因，提取质粒pKVM1以及重组连接等方法，构建出pKVM 1：：metK′敲除质粒，将质粒电转化到Bacillus cereus EN34中进行metK交换，再筛选出单交换成功的菌株，最后获得metK弱化成功Bacillus cereus EN34Δ(metK)菌株。经发酵培养基硫源优化分析得出，单独增强metI表达不能提高蛋氨酸产量，产量与出发菌株基本一致；改变metK基因，能提高蛋氨酸产量，但不能完全删除metK基因，否则将导致细胞死亡。硫源采用 200 μL/L 甲基硫醇钠和二甲基硫醚的混合物(体积比19 ∶1)、15 g/L的Na2SO4，二者结合，Bacillus cereus EN34Δ(metK)菌株蛋氨酸产量为440.66 mg/L，是出发菌株的20倍。本研究为芽孢杆菌工程菌的构建了提供一定的技术支持。
Abstract:
-

参考文献/References:

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备注/Memo

备注/Memo:
收稿日期：2020-02-18
基金项目：江苏省大学生创新创业计划(编号：201810332059X)；苏州科技发展规划农业基础设施项目(编号：SYN201507)；苏州科技大学科学研究项目(编号：XKQ201611)。
作者简介：汤玥(1999—)，女，江苏扬州人，主要从事发酵工程方面的研究。E-mail：1430701525@qq.com。
通信作者：胡翠英，硕士，高级实验师，主要从事发酵工程方面的研究。E-mail：13151170848@163.com。
更新日期/Last Update: 2020-11-20