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《江苏农业科学》[ISSN:1002-1302/CN:32-1214/S]

卷:

第47卷

期数:

2019年第10期

页码:

66-69

栏目:

生物技术

出版日期:

2019-06-12

文章信息/Info

Title:

Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of transcription factor BcAP2-13 in Bupleurum chinense DC.

作者:

徐娇¹;  朱楚然¹; 2;  都明理¹; 2;  王丽红²;  隋春¹;  魏建和¹

1.中国医学科学院&北京协和医学院药用植物研究所/中草药物质基础与资源利用教育部
重点实验室/濒危药材繁育国家工程实验室，北京 100193； 2.佳木斯大学，黑龙江佳木斯 154007

Author(s):

Xu Jiao; et al

关键词:

北柴胡; 转录因子; 原核表达; 多克隆抗体制备; 免疫印迹

Keywords:

-

分类号:

S188；S567.7⁺90.1

DOI:

-

文献标志码:

A

摘要:

利用带有促溶标签SUMO和纯化标签6×His的原核表达载体，构建了调控北柴胡皂苷生物合成的转录因子基因BcAP2-13的原核表达载体p13-SUMO-His6。载体热激转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)后，用异丙 基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside，IPTG)诱导培养，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表明，28 ℃和37 ℃不同温度诱导条件下均得到了融合蛋白13-SUMO-His 6。以Ni-NTA柱纯化的融合蛋白为抗原，免疫成年兔4次以制备多克隆抗体。间接酶联免疫法检测结果表明，所得抗体效价较高。提取北柴胡毛状根及BcAP2-13超表达毛状根的总蛋白，免疫印迹检测结果表明，在2种毛状根蛋白样品中均能检测到与预计13-SUMO-His6蛋白分子量大小一致的条带，BcAP2-13过表达毛状根总蛋白样品的条带强于普通毛状根总蛋白样品的条带，与预期一致。成功制备了北柴胡BcAP2-13的多克隆抗体，为进一步研究北柴胡转录因子BcAP2-13的确切作用位点和调控机制奠定了基础。

Abstract:

-

参考文献/References:

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备注/Memo

备注/Memo:

收稿日期：2019-01-27
基金项目：中国医学科学院医学与健康科技创新工程-重大协同创新项目(编号：2016-I2M-2-003)。
作者简介：徐娇(1994—)，女，硕士研究生，研究方向为药用植物次生代谢产物合成与调控。E-mail：xujiao182249@163.com。
通信作者：隋春，研究员，研究方向为药用植物次生代谢产物合成与调控，E-mail：csui@implad.ac.cn；魏建和，研究员，研究方向为药用植物基因资源与分子育种及次生代谢产物调控研究，E-mail：wjianh@263.net。

常用功能

更新日期/Last Update: 2019-05-20